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DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统的建立

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发表于 2009-10-19 20:24 | 显示全部楼层 |阅读模式
法医学杂志,2005年04期
DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统的建立
孙宏钰; 蔡贵庆; 陆惠玲; 刘超; 陈丽娴; 李向阳; 伍新尧
中山大学基础医学院法医学系; 广州市刑事科学技术研究所; 广州市公安局东山区分局; 中山大学基础医学院法医学系 广东广州; 广东广州
【中文摘要】 目的基于变性高效液相色谱技术,建立一种不需测序和杂交的新的mtDNA控制区多态性分析系统。方法mtDNA控制区序列(包括HVⅠ,HVⅡ和HVⅢ)被分为4个扩增片段,采用配对分析突变检测模式进行DHPLC分析。对DHPLC检测条件(包括柱温和洗脱梯度等)进行优化。对100个不同类型差异序列的组合配对以检验该方法的检测效力。结果10组序列相同的样本配对DHPLC图谱均只显示1个样品峰。对序列相差1个碱基~7个碱基、插入(/缺失)1个碱基、插入(/缺失)2个碱基等类型的90个扩增片段组合,用DHPLC进行分析,均得到≥2个样本峰的DHPLC图谱,序列差异检出率达100%。该技术可检测的异质性DNA成分的最小百分含量为10%。结论DHPLC-mtDNA控制区多态性分析系统快速、经济和实用,在检测mtDNA异质性方面较直接测序更灵敏。

【中文关键词】 线粒体DNA(mtDNA); 变性高效液相色谱(DHPLC); 多态性; 异质性

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